Spectrophotometricכימות חלבון ערכי צבע מוחלטים
חלבונים הם בדרך כלל תערובת של חלבונים. מבחני ערכי צבע מוחלטים מבוססים על חלבון המרכיבים: חומצות אמינו (למשל, טירוזין, סרין) מגיבים עם קבוצה הדפסות כסף נוספים או צבע כדי לייצר חומר צבעוני. הריכוז של חומר צבעוני קשור ישירות המספר של חומצות אמינו החלבון מגיב, ובכך המשקף את הריכוז של חלבון.
שיטת ערכי צבע מוחלטים
ישנן מספר שיטות כגון BCA, ברדפורד, לאורי.
שיטת לאורי: התגובה Biuret המוקדם ומשופר. החלבון מגיב עם Cu2 לייצר תגובת כחול. עם זאת, שיטת לאורי הוא רגיש יותר Biuret. החיסרון הוא הצורך ברצף להוסיף מספר נוגדנים שונים; התגובה אורכת זמן רב; היא חשופה לחומרים שאינם-חלבון; חלבונים המכילה EDTA, טריטון x-100, אמוניה סולפט אינם מתאימים עבור שיטה זו.
Bicinchoniinine assay חומצה: זה וזמינותו חלבון חדש, רגיש יותר. החלבון כדי להיות מנותח מגיב Cu2 בפתרון אלקליין לייצר Cu, המהווה chelate עם BCA להקים מתחם סגול עם שיא קליטה במלון-562 ננומטר. הקשר הליניארי בין הריכוז של מתחם זה החלבון הוא חזק, המתחם שנוצר לאחר התגובה יציב מאוד. יחסי בשיטה לאורי, הפעולה היא פשוטה והיא הרגישות גבוהה. עם זאת, בדומה לשיטת לאורי, זה חשופה להפרעות עם חלבונים וחומרי ניקוי.
שיטת ברדפורד: העיקרון של שיטה זו הוא כי החלבון מגיב עם Coomassie מבריק הכחול כדי לייצר מתחם צבעוני זה סופג-595 nm. התכונה הכי גדול שלה הוא הרגישות שלה, אשר הוא פי 2 מזה של לאורי, BCA. זה יותר פשוט ומהיר. זה דורש רק סוג אחד של ריאגנט התגובה. המתחם יכול להיות יציב למשך שעה להקל על התוצאה; הפרעה לאורי, BCA מגיב עם צמצום סוכנים (למשל DTT, mercaptoethanol) תואם. עם זאת, עדיין רגיש דטרגנטים. החיסרון העיקרי הוא כי סטנדרטים שונים יכול להוביל הבדלים גדולים בתוצאות המדגם אותו ללא תוצאות דומות.
יש חוקרים אשר נחשפים מדידות ערכי צבע מוחלטים בפעם הראשונה עשויה להיות מבולבל על ידי התוצאות של הבדיקות השונות ערכי צבע מוחלטים. ? איזה סוג של שיטות אתה מאמין להתבלבל? בשל העובדה כי הקבוצות הגיבו בדרכים שונות, הקבוצות הדפסות כסף אינן זהות, מספר שיטות משמשים בו זמנית כדי להפוך את ריכוזי מדגם באותה דגימת זרע לא עקבי. לדוגמה, קלר ואח נבדק החלבון בחלב האנושי ונמצא כי הריכוזים נמדדו על ידי לאורי BCA היה גבוה משמעותית מזה של ברדפורד. ההבדל היה משמעותי. גם אם נקבע באותה דגימת זרע, המדגם רגיל נבחר על-ידי ערכי צבע מוחלטים באותה השיטה לא עקבית, הריכוז לאחר הבדיקה עולה גם בקנה אחד. לדוגמה, השתמש לאורי כדי לבחון את החלבון homogenate תא, באמצעות BSA כסטנדרט, עם ריכוז של 1.34 מ"ג/מ"ל, של גלובולין כסטנדרט עם ריכוז של 2.64 מ"ג/מ"ל. לכן, לפני בחירת שיטה ערכי צבע מוחלטים, עדיף להפנות ההרכב הכימי של המדגם להיבדק, ולמצוא חלבון סטנדרטית כימית דומה כסטנדרט. בנוסף, שיטת ערכי צבע מוחלטים לכימות חלבונים לעיתים קרובות גורמת לבעיות כי הערך ספיגת המדגם הוא נמוך מדי, וכתוצאה מכך הבדל גדול בין ריכוז מדגם נמדד הריכוז בפועל. נושא המפתח זה הצבע של החלק החשוב של ספקטרופוטומטרים 1011, cuvette, יש מחצית חיים מסוימים, אז כל שיטת ערכי צבע מוחלטים מפרטת את זמן הבדיקה התגובה. כל דוגמאות (כולל דוגמאות סטנדרטי) הם חייבים להיבדק בתוך פרק זמן זה. אם הזמן ארוך מדי, הערך ספיגת שהושג הופכת לקטנה ומקטינות הערך ריכוז המרה. בנוסף, את טמפרטורת התגובה, ערך ה-pH הפתרון, וכו ' הם כולם חשובים גורמים שמשפיעים על הניסוי. בנוסף, חשוב מאוד להשתמש colorimetry פלסטיק. הימנע משימוש וואקום עשויה קוורץ או זכוכית בגלל הצבע לאחר התגובה יגרום קוורץ או זכוכית כדי להיות צבעוני, וכתוצאה מכך ספיגת לא מדויק של המדגם.
החברה מתמחה במכירתספקטרופוטומטרים, ברוכים הבאים לקוחות יש צורך להתייעץ עם ולרכוש, אנו נספק לך שירות כנה מוצרים איכותיים, כמו גם מחירים נמוכים יותר.
דואר אלקטרוני:info@sumerlab.com
אינטרנט:sumerinstrument.com