כימות של חומצות גרעין ספקטרופוטומטרים
כימות של חומצות גרעין היא הפונקציה הנפוצה ביותר של ספקטרופוטומטר. אוליגונוקליוטידים, דנ"א חד-גדילי, דו-גדילי תקועים, ו- RNA ניתנים לכימות במאגרים. שיא הקליטה של שיא הקליטה הגבוהה ביותר של חומצה גרעין הוא 260 ננומטר. כל חומצה גרעין יש הרכב מולקולרית שונים ולכן יש גורמים המרה שונים. כדי לכמת סוגים שונים של חומצות גרעין, בחר את המקדמים המתאימים מראש. לדוגמה, ספיגת 1OD שווה ל 50 מיקרוגרם / מ"ל dsDNA, 37 מיקרוגרם / מ"ל ssDNA, 40 מיקרוגרם / מ"ל RNA, ו 30 מיקרוגרם / מ"ל אוליג, בהתאמה. ערך ספיגת לאחר הבדיקה מומרת על ידי המקדם הנ"ל כדי לקבל את הריכוז המדגם המקביל. לפני הבדיקה, בחר את ההליך הנכון, הזן את אמצעי האחסון של פתרון המניות diluent, ולבדוק את פתרונות ריק מדגם. עם זאת, הניסוי לא היה קל. קריאה בלתי יציבה עשויה להיות כאב הראש הגדול ביותר עבור הניסויים. ככל שהרגישות של המכשיר גבוהה יותר, כך גדלה ספיגת הקליטה המוצגת.
למעשה, עקרון התכנון ועקרון העבודה של ספקטרופוטומטר לאפשר את הערך absorbance לשנות בטווח מסוים, כלומר, המכשיר יש מידה מסוימת של דיוק ודיוק. כגון דיוק Eppendorf Biophotometer ≤ 1.0% (1A). התוצאות של בדיקות מרובות אלה משתנות בין ממוצע של 1.0% וכולם רגילים. בנוסף, יש לקחת בחשבון גם את התכונות הפיסיקוכימיות של החומצה הגרעינית, את ה- pH של המאגר להמסת החומצה הגרעינית, את ריכוז היונים וכדומה. במהלך הבדיקה, ריכוז יונים גבוה מדי יגרום גם לקריאה להיסחף כמו TE, אשר יהיה מאוד לייצב את הקריאה. הריכוז המדולל של המדגם הוא גם גורם לא זניח: בשל הנוכחות הבלתי נמנעת של חלקיקים קטנים במדגם, במיוחד דגימות חומצות גרעין. נוכחותם של חלקיקים קטנים אלה מפריעה לאפקט המבחן. כדי למזער את השפעת החלקיקים על תוצאות הבדיקה, ספיגת החומצה הגרעינית צריכה להיות לפחות 0.1 A, והקליטה עדיפה בין 0.1-1.5 א '. בטווח זה, אין צורך בבועות תערובת, ואין השעייה ריקה. אחרת, הקריאות נסחפות באלימות; את הכוס colorimetric אותו יש להשתמש כדי לבדוק את ריק המדגם; אחרת, ההבדל בריכוז גדול מדי; מקדם ההמרה ויחידת הריכוז המדגם הם זהים; הקובט משוחק על ידי החלון; נפח המדגם חייב להגיע יותר מאשר נפח המינימום הנדרש של כוס צבע, וכו '
בנוסף לריכוז חומצות גרעין, ספקטרופוטומטר מציג כמה יחסים חשובים מאוד בו זמנית כדי להצביע על טוהר המדגם, כגון יחס A260 / A280, לצורך הערכת טוהר המדגם, מאז שיא הקליטה של חלבון הוא 280 ננומטר. דגימות טהור יש יחס גדול יותר מאשר 1.8 (DNA) או 2.0 (RNA). אם היחס הוא פחות מ 1.8 או 2.0, הוא מציין את נוכחותם של חלבונים או חומרים פנוליים. A230 מציין כי ישנם כמה מזהמים במדגם, כגון פחמימות, פפטידים, פנולים וכו 'היחס של חומצה גרעין טהור A260 / A230 גדול מ 2.0. A320 מזהה את העכירות של הפתרון ואת גורמי הפרעה אחרים. מדגם טהור, A320 הוא בדרך כלל 0.
החברה מתמחה במכירת ספקטרופוטומטרים , ברוכים הבאים ללקוחות שיש להם צורך להתייעץ ולרכוש, אנו נספק לך שירות כנה ואיכות מוצרים, כמו גם מחירים נמוכים יותר.
דואר אלקטרוני: info@sumerlab.com
אינטרנט: sumerinstrument.com